穿山龍收載于 2015 年版 《中國(guó)藥典》一部， 為薯蕷科植物穿龍薯蕷 Dioscorea nipponica Makino 的干燥根莖，于春、秋二季采挖，洗凈，除去須根 和外皮，曬干，具有祛風(fēng)除濕、舒筋通絡(luò)、活血止 痛、止咳平喘等功效。江慧等優(yōu)化了穿山龍 中薯蕷皂苷的酶提取工藝，然而穿龍薯蕷中甾體皂 苷的種類較多，以這些皂苷類為指標(biāo)進(jìn)行質(zhì)量 控制時(shí)需要多個(gè)對(duì)照品，且分析條件復(fù)雜，不利于 開(kāi)展日常檢測(cè)工作。

1 材料

AE240 電子分析天平 ( 萬(wàn)分之一，瑞士梅特 勒-托利多公司) ; Alpha 1-2LD 冷凍干燥機(jī) ( 德國(guó) Christ 公司) ; HH-4 數(shù)顯恒溫水浴鍋 ( 國(guó)華電器有 限公司) ; ＲE-52A 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 ( 上海亞榮生化儀 器廠) ; GSH-0. 5 加壓反應(yīng)釜 ( 內(nèi)膽 PTFE 覆膜， 威海坤昌化工有限公司) ; ＲHP-800 型高速多功能 粉碎機(jī) ( 浙江永康榮浩工貿(mào)有限公司) ; 20AVp HPLC 系統(tǒng) ( 日本島津公司) ; N2000 SP1 色譜工 作站 ( 浙江大學(xué)智達(dá)信息工程有限公司) 。薯蕷皂苷元對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院 ( 批號(hào) 111539-200001) 。超純水 ( 力康生物醫(yī)療科技控股 有限公司) ; 乙腈為色譜純 ( 美國(guó)歐姆尼公司) ; 其他試劑 均 為 分 析 純 ( 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司) 。 穿山龍于 2017 年 11 月至 2018 年 4 月采自黑 龍江伊春、黑龍江尚志、吉林樺甸、吉林通化、吉 林白山、遼寧葫蘆島、陜西寶雞、河南洛陽(yáng)、山東 泰安和江蘇鎮(zhèn)江，并經(jīng)江蘇大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)研究 所陳鈞教授鑒定為穿龍薯蕷 Dioscorea nipponica Makino 的根莖。藥材經(jīng)冷凍干燥、粉碎后過(guò) 40 目 篩，收集細(xì)粉，置于電熱鼓風(fēng)干燥箱（博迅GZX-9070MBE電熱鼓風(fēng)干燥箱）中保存。

2 方法與結(jié)果

沃特世 Sunfire ＲP18柱 ( 150 mm× 4. 6 mm，5 μm) ; 流動(dòng)相乙腈-水 ( 88 ∶ 12) ; 體積 流量1. 0 mL /min; 柱溫 30 ℃ ; 檢測(cè)波長(zhǎng) 203 nm; 進(jìn)樣量 20 μL; 分析時(shí)間 15 min。精 密 稱 取 薯 蕷 皂 苷 元 14. 00 mg，無(wú)水乙醇溶解并定容至 10 mL，得到質(zhì) 量濃度為 1 400 μg /mL 的對(duì)照品貯備液，無(wú)水乙醇 2 倍 稀 釋，依 次 得 到 質(zhì) 量 濃 度 為 700. 0、350. 0、 175. 0、97. 50、43. 75、21. 88、10. 94 μg /mL 的對(duì) 照品溶液，并用 0. 22 μm 針頭式微孔濾器過(guò)濾， 棄去初濾液，收集續(xù)濾液，即得。精密稱 取穿山龍粉末 8. 00 g，按 1 ∶ 4 比例與細(xì)沙混合并 裝填于不銹鋼色譜柱中，加入 50%乙醇 160 mL 于 80 ℃下加壓萃取 4 h，收集流出液，減壓回收至無(wú) 醇味，200 μL 濃硫酸定容至 50 mL，再加入 50 mL 石油醚 ( 90 ～ 120 ℃ ) ，于 150 ℃下加壓水解2. 0 h， 持續(xù)攪拌 ( 100 r /min) 。分取石油醚層，水洗至中 性，減壓回收溶劑至干，殘留物以無(wú)水乙醇溶解并 定容至 100 mL，用 0. 22 μm 針頭式微孔濾器濾過(guò)， 棄去初濾液，收集續(xù)濾液，即得。

3 討論與結(jié)論

在對(duì)穿山龍藥材的供試品溶液中的薯蕷皂苷元 進(jìn)行分析時(shí)，比較了色譜柱 SunFire ＲP18( 150 mm× 4. 6 mm，5 μm) 、Luna C18 ( 4. 6 mm × 150 mm， 5 μm) 、 Eclipse XDB C18 ( 4. 6 mm × 150 mm， 5 μm) ，發(fā)現(xiàn)采用 SunFire ＲP18色譜柱時(shí)，薯蕷皂 苷元大約在 10 min 出峰，時(shí)間適中，色譜峰的對(duì) 稱性好，并且與其他成分實(shí)現(xiàn)了基線分離。 在以傳統(tǒng)技術(shù)制備穿山龍供試品溶液的過(guò)程中，常用索氏抽提法、直接酸水解法，存在耗時(shí) 長(zhǎng)、硫酸濃度高、測(cè)定含有量偏低等不足。本研究 采用了加壓液體萃取法和加壓兩相酸水解法，在加 壓條件下，前者可以使穿山龍中的總甾體皂苷被快速、徹底地萃取出來(lái); 后者則只需要使用低濃度硫 酸，并且水解時(shí)間大為縮短，有利于保護(hù)薯蕷皂苷 元的化學(xué)結(jié)構(gòu)，從而使含有量得以提高，并有 利于環(huán)境保護(hù)，提高制備效率。



 

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