木姜葉柯 Lithocarpus litseifolius( Hance) Chun 為殼斗 科柯屬常綠植物，多分布在長(zhǎng)江以南的低山密叢中， 藥 食兼 用 ，可 做 茶、糖、藥 。其 有 清 熱 利尿、滋肝 養(yǎng) 胃、化痰、祛風(fēng)、降壓等功效，可用于治療濕熱痢疾、皮 膚瘙癢、肺熱咳嗽、高血壓等癥。近代醫(yī)學(xué)研究證明， 木姜葉柯具有抗氧化 、免疫抑制、降血糖等藥理 作用。三葉苷是其主要活性成分之一，具有抗糖尿病、 抗人類(lèi)免疫缺陷病毒 ( HIV) － 1 感染 、抗炎等作用。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

1260 型 高 效 液 相 色 譜 儀 ，包 括 G1311B 四 元 泵、 4212BDAD 型二極管陣列檢測(cè)器( 美國(guó) Agilent 公司) ; AUW120D 型電子分析天平 ( 日 本 Shimadzu 公 司 ) ; Mighty － 10 型超純水機(jī)( 上海礫鼎水處理設(shè)備有限公司) ; BZF-50 型真空干燥箱( 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè) 備廠) ; 薄層色譜( 青島海洋化工廠) 。

1．2 試藥

三葉苷對(duì)照品( 四川省維克奇生物科技有限公司， 批號(hào)為 WKQ18052505，含量 ＞ 98． 0% ) ; 所用試劑均為 分析純，水為超純水。木姜葉柯藥材購(gòu)自湖南省溆浦縣 君健中藥材專(zhuān)業(yè)合作社，經(jīng)湖南醫(yī)藥學(xué)院蔡偉副教授鑒 定為正品。

2 方法與結(jié)果

2．1 提取、分離與結(jié)晶

取木姜葉柯藥材 0． 1 kg，用粉碎機(jī)稍加粉碎，過(guò) 2 號(hào)篩，置 2 000 mL 圓底燒瓶中，以 10 倍量水在 80 ℃ 條 件 下 提 取 3 次 ，每 次 1 h，得 殘 渣 和 濾 液 ，合 并 濾 液，于冰箱冷藏靜置 12 h，濾過(guò)，得黃色沉淀物，減壓干 燥( 55 ℃ ) 24 h，得三葉苷粗品。在無(wú)水乙醇溶液中緩慢 加入三葉苷粗品，邊加熱邊溶解，待三葉苷飽和溶解后， 冷卻溶解液得結(jié)晶，重復(fù) 3 次，干燥，得三葉苷純品。

2．2 水分測(cè)定

按 2015 年版《中國(guó)藥典(四部)》通則 0832 項(xiàng)下水 分測(cè)定法第二法( 烘干法) 測(cè)定三葉苷純品中的水分。取 三葉苷純品約 2 g，置干燥至恒重的稱(chēng)量瓶中，精密稱(chēng) 定，打開(kāi)錐形瓶瓶塞，置 105 ℃干燥箱中干燥 5 h，移出， 并迅速蓋上瓶蓋，置干燥器中冷卻 30 min，精密稱(chēng)定，繼續(xù)干燥 1 h，迅速取出，冷卻后稱(chēng)定質(zhì)量，連續(xù) 2 次干燥 后的質(zhì)量差小于 5 mg 時(shí)停止干燥，根據(jù)損失的質(zhì)量，計(jì) 算三葉苷純品中水分含量，重復(fù) 3 次。結(jié)果三葉苷純品 水分含量為(3． 550 ± 0． 163 )% 。

2．3 結(jié)構(gòu)鑒定

白 色 針 狀 結(jié) 晶 。1 H － NMR ( 500 MHz，DMSO) δ: 7． 03( 2H，d，J = 8． 0 Hz，H － 2，H － 6) ，6． 66( 2H，d，J = 8． 0 Hz，H － 3，H － 5 ) ，6． 04( 2H，S) ，4． 88( 1H，d，J = 7． 71 Hz) ，5． 36( 1H，d，J = 5． 82 Hz) ，5． 13( 1H，d，J = 5． 42 Hz) ，2． 78( 2H，t，J = 7． 66 Hz，H － β) 。13 C － NMR δ: 131． 49( C － 1) ，129． 20( C － 2，C － 6) ，155． 42( C － 4 ) ， 115． 09( C － 3，C － 5) ，45． 77( C － α) ，29． 32( C － β) ， 205． 07( C  O) ，105． 23( C － 1' ) ，163． 39( C － 2' ，C － 6') ，95． 07 ( C － 3'，C － 5') ，163． 74( C － 4') ，99． 52( C － 1″ ) ，73． 05( C － 2″ ) ，76． 41( C － 3″ ) ，69． 41( C － 4″ ) ， 77． 14( C － 5″) ，60． 48( C － 6″) 。以上數(shù)據(jù)與報(bào)道結(jié)果基本一致，故鑒定化合物為三葉苷。

2．4 薄層鑒別

取三葉苷對(duì)照品和三葉苷純品各適量，分別加甲醇 溶解制成對(duì)照品溶液和供試品溶液。按 2015 年版《中國(guó) 藥典( 四部) 》TLC 法試驗(yàn)，吸取上述 2 種溶液各 10 μL， 分別點(diǎn)于同一硅膠 G 薄層板上，分別以石油醚 － 正丁 醇( 1 ∶ 8，V / V) 、乙酸乙酯 － 正丁醇( 2 ∶ 1，V / V) 、乙酸 乙酯 － 丙酮( 3 ∶ 2，V / V) 為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置 日光燈下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色 譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，詳見(jiàn)圖 1。


3 討論

三葉苷是木姜葉柯具有降糖活性的主要成分，對(duì)α － 葡萄糖苷酶有明顯抑制作用，與阿卡波糖效果相 當(dāng)?，F(xiàn)有關(guān)于木姜葉柯中三葉苷提取、分離報(bào)道較 少，且大多采用乙醇水溶液進(jìn)行提取。本試驗(yàn)中以 水提取，相對(duì)于乙醇更環(huán)保。 傳統(tǒng)的重結(jié)晶溶劑多采用甲醇，毒性很大，在使用 過(guò)程中，對(duì)人體的神經(jīng)系統(tǒng)和血液系統(tǒng)影響較大，經(jīng)消 化道、呼吸道或皮膚攝入都會(huì)產(chǎn)生毒性反應(yīng)，特別是甲 醇蒸氣對(duì)呼吸道黏膜和視力損傷很大。本試驗(yàn)中采用乙 醇進(jìn)行熱飽和結(jié)晶，得到三葉苷的純度高，污染小，水分 量小，經(jīng)碳譜、氫譜、薄層色譜鑒定均為正品。



 

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