非洲豬瘟（ASF）是由非洲豬瘟病毒（ASFV） 引起的一種急性、烈性豬傳染病，發(fā)病率、致死率 可高達 100%，危害嚴重，對養(yǎng)豬業(yè)可造成毀滅性 打擊，可引起巨大的經(jīng)濟損失和社會影響。ASF 自 2018 年 8 月在遼寧省首發(fā)以來，已在我國多個 省份發(fā)生。為進一步加強 ASF 防控，新疆地區(qū) 加強臨床監(jiān)視、現(xiàn)場排查，對生豬從生產(chǎn)到屠宰全 程進行采樣監(jiān)測，嚴格控制生豬及其產(chǎn)品調(diào)運監(jiān)管， 多部門協(xié)調(diào)聯(lián)動，形成了良好的工作機制。

1　材料

1.1　樣品

樣品來源：動物公路檢查站攔截的速凍豬肉 餡水餃，其中來源于 A 廠 13 個批次、B 廠 1 個批次； 在冷庫、超市中抽檢 B 廠速凍豬肉餡水餃 11 個批 次。樣品的采集、保存和運輸嚴格按照《非洲豬瘟 監(jiān)測樣品采集、保存與運輸方法》中的要求，以 豬肉產(chǎn)品的批次為采樣單位，每批次按豬肉產(chǎn)品包 裝的規(guī)格（件 / 箱）隨機抽樣。數(shù)量為每批次隨機 抽取 10 件（箱），每件（箱）采集樣品 2 份，合 計每批次采集樣品 20 份。

1.2　試劑

天根磁珠法病毒 DNA/RNA 提取試劑盒（批號 S7327）、DNA 病毒反應(yīng)液（批號 20181129）： 購自北京世紀元亨動物防疫技術(shù)公司；TaqMan 探針、ASFV 特異性引物、提取陽性對照、反應(yīng)陽性 對照：均由中國動物衛(wèi)生流行病學(xué)中心提供。

1.3　儀器設(shè)備

上海博訊電熱恒溫水槽 SSW-600-2S、Bertin Precellys evolution 高通量組織研磨儀、Sigma3K-15 臺式冷凍高速離心機、天隆 NP968 自動核酸提取 儀、QuantStudio5 實時熒光定量 PCR 儀。

2　方法

2.1　樣品處理

每批次每袋隨機挑取 2~3 個餃子，挑出其中 的豬肉進行剪碎。在加有陶珠的組織研磨管中， 加入 1 mL PBS 緩沖液，再加入剪碎的樣品約 100 mg，使用 Bertin Precellys 組織研磨儀進行勻 漿處理。處理后放入 60 ℃水浴鍋滅活 30 min，每 間隔 5 min 顛倒混勻樣品 1 次。

2.2　病毒 DNA 提取

對滅活后的樣品 4 ℃ 2 000 r/min，離心 10 min； 取 200 μL 上清液，使用磁珠法病毒 DNA 提取試 劑盒提取 DNA；將提取的核酸于 −20 ℃冰箱中保 存?zhèn)溆谩?br />
2.3　熒光定量

PCR 采 用 ASFV 特異熒光定量 PCR 方法擴增 ASFV VP72 基因片段 。PCR 以 20 μL 體系進行： DNA 病毒熒光反應(yīng)液 10 μL、ROX 0.2 μL、無菌無 核酸水 5.7 μL、正向引物 0.8 μL、反向引物 0.8 μL、 TaqMan 探針 0.5 μL，模板 DNA 2 μL。同時，設(shè)立 提取陽性 / 陰性對照、反應(yīng)陽性 / 陰性對照。密封 反應(yīng)試管，瞬時離心，放入熒光 PCR 儀，按照熒 光 PCR 循環(huán)條件擴增。

3　結(jié)果

根據(jù) ASFV 檢測操作規(guī)程分析，樣品 Ct 值低 于 40 為陽性。12 月 5 日檢測的 13 個批次樣品中， 有 5 個批次檢測到 ASFV 特異性擴增曲線，Ct 值 為 28.3~32.68（圖 1），其他批次熒光定量 PCR 檢 測結(jié)果見表 2。



4　討論

4.1　陽性豬肉產(chǎn)品的處置

新疆畜牧獸醫(yī)局接到中國動物衛(wèi)生流行病學(xué) 中心的復(fù)核確診后立即行動，要求動物衛(wèi)生監(jiān)督部 門會同食品藥品監(jiān)管部門按照應(yīng)急預(yù)案開展處置工 作，銷毀陽性樣品，并通知各級食品藥品監(jiān)管部門、 畜牧獸醫(yī)等部門，對同批次產(chǎn)品進行無害化處理， 對相關(guān)場所進行徹底清洗消毒，同時繼續(xù)加強開展 ASF 疫情排查工作。

4.2　加強流調(diào)溯源

本次速凍豬肉水餃中 ASFV 核酸的確診在 國內(nèi)是首次，能從豬肉產(chǎn)品中檢出 ASFV，說明ASFV 已形成了一定污染面。此次在速凍豬肉水餃 中檢出 ASFV 核酸，推斷是由于潛伏期帶毒豬沒 有臨床癥狀，屠宰后進入加工企業(yè)，被加工生產(chǎn)成 豬肉制品所造成的 。ASFV 自身較脆弱，對熱抵 抗力不強。雖然此類豬肉制品一般直接進入餐桌， 在蒸煮烹飪過程，均能將病毒殺死，但是水餃中豬 肉的溯源應(yīng)引起主管部門的高度重視，這也是控制 疫病傳播風險的重要環(huán)節(jié)。水餃在烹飪過程中，如 果未對豬肉進行高溫處理，未煮熟的水餃會以餐廚 垃圾喂豬或進入養(yǎng)殖戶，很容易造成 ASFV 的傳播擴散 。其次如果在加工處理車間，人員、車輛、 污水、廢棄物處理不當，就有可能造成病毒擴散， 從而引發(fā)新的疫情 。因此，要加強產(chǎn)地檢疫和屠 宰場的實驗室檢測，及時發(fā)現(xiàn)發(fā)病豬和處于潛伏期 的豬，防止問題豬肉流入食品生產(chǎn)環(huán)節(jié)。

4.3　繼續(xù)做好 ASF 防控

目前國內(nèi) ASF 疫情仍呈點狀散發(fā)態(tài)勢，因豬 肉制品調(diào)入而傳播 ASF 的風險較高，因此應(yīng)該警 惕通過污染病毒的豬肉制品而引發(fā)疫情的可能。 鑒于目前 ASF 防控形勢仍較嚴峻，今后仍需重點 排查養(yǎng)殖場、生豬交易市場、屠宰場等高風險場 點，同時加大公路檢查站對跨省入疆生豬和豬肉 產(chǎn)品的檢查和查處力度，嚴格控制從疫區(qū)調(diào)入生 豬及相關(guān)產(chǎn)品。